昆虫细胞培养小百科

        在细胞培养中，主要分为植物细胞培养和动物细胞培养。植物细胞培养和动物细胞培养在培养原理、培养过程、培养基等多个方面均有较大的差别。在动物细胞培养中还可以分为哺乳动物细胞培养和昆虫细胞培养两大类，这两类细胞培养也有较大的差别。

        昆虫细胞培养是从昆虫体内取出细胞，模拟昆虫体内的生理环境，在无菌、适温和丰富的营养条件下，使细胞生存、生长并维持结构和功能的一门技术。它是近年来迅速发展起来的细胞工程中的一个领域，广泛应用于医学、农业及生物学的各个方面。目前，其主要应用的两个方面：利用杆状病毒在昆虫细胞内的感染、复制，以大量生产昆虫病毒作为生物杀虫剂；大量表达杆状病毒携带的外源基因生产重组蛋白质。

常用于培养的昆虫细胞大概有两种，sf9和sf21细胞系：

        Sf9昆虫细胞系是来自草地贪夜蛾 IPLB-Sf21-AE 亲本细胞系的克隆分离株，它是利用杆状病毒表达系统进行重组蛋白表达的合适宿主。虽然以往人们利用由培养角瓶和含血清基础培养基组成的静止培养系统进行昆虫细胞的培养，但是一般而言昆虫细胞并无贴壁依赖性，便于进行悬浮培养。

        sf21细胞是从草地贪夜蛾 (秋粘虫) 分离得到的卵巢细胞。该细胞为球型，大小不等，略呈颗粒状外观。Sf21 细胞可解冻后直接悬浮培养，用于细胞库的快速扩增、杆状病毒库的扩增和重组蛋白的生产。由于Sf21细胞与支持物表面贴附牢固，因此可通过单层培养用于转染或菌斑试验。

昆虫细胞悬浮培养形态

昆虫细胞培养基：

        昆虫细胞培养基的发展经历了天然培养基、合成培养基和无血清培养基三个阶段。天然培养基采用取自动物体液或从组织中提取的成分作为培养液。合成培养基最大的特点是各种成分已知。无血清培养基是在已知细胞所需营养物质和贴壁因子基础上，在基础培养基中加入适宜的促细胞生长因子，能够保证细胞生长良好无须补加血清的培养基。昆虫细胞培养基的发展主要是合成培养基的发展。

贴壁昆虫细胞传代的注意事项：

        虽然昆虫细胞传代的一般步骤与哺乳动物细胞相同，但是这些培养系统的一些关键要求有所不同。为了获得最佳结果，实验中必须严格遵守所有产品附带的操作说明。

• 昆虫细胞应在对数期传代。但是，如果培养的是强贴壁性昆虫细胞，则应在细胞达到汇合状态或者刚刚开始从培养瓶底部脱离时进行传代，因为此时细胞容易脱离。

• 细胞密度低于汇合状态的 20%时，细胞生长会受到抑制。健康状态最好的细胞是对数期收获的细胞。

• 培养昆虫细胞时建议不要进行二氧化碳交换。

• 昆虫细胞应于 27°C、非湿化环境中培养。在避光条件下可将细胞放在操作台上或者放入抽屉中于室温下培养。但是，建议使用温度控制在 27°C 的环境。

• 使用昆虫细胞专用的培养基。

• 在无血清培养条件下，昆虫细胞与基质贴附极为牢固，需要花费较大力气才能使其脱落。要使细胞脱落，可以采用拍掌的动作快速振摇一下培养瓶。为了避免污染，进行 此操作前必须盖紧盖子。

  警告：建议不要剧烈摇晃培养瓶，因为这样可能会造成细胞损伤。

悬浮昆虫细胞传代的注意事项：

• 进行细胞悬浮培养时无需更换培养基。定期传代时需要吸出细胞悬液，然后加入适量培养基，将细胞稀释到适当的密度。添加新鲜培养基后可使细胞营养素达到完全补充。

• 培养昆虫细胞时建议不要进行二氧化碳交换。

• 昆虫细胞应于 27°C、非湿化环境中培养。可将细胞放在操作台上或者抽屉中于室温下培养，但是建议使用温度控制在 27°C 的环境。

• 使用昆虫细胞专用的培养基。

• 使用表面活性剂降低剪切作用。进行昆虫细胞旋转培养时建议使用表面活性剂，可降低叶轮导致的细胞膜剪切作用。

• 某些昆虫细胞系可能需要一定的过程来适应悬浮培养。

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